Subcultura celulara si liniile celulare - inginerie tisulara

SUBCULTURA CELULARA SI LINIILE CELULARE - INGINERIE TISULARA

Notiuni generale

Cresterea celulelor din cultura primara duce la epuizarea substratului si oprirea diviziunilor produsa de "inhibitia de contact"

Odata subcultivata (pasaj celular) cultura devine linie celulara

O linie celulara contine mai multe tipuri de descendente celulare, cu fenotip  asemanator sau diferit

Prin selectia unui singur tip de descendenta celulara prin clonare se obtin o tulpina celulara (susa celulara) 

Linie celulara continua - o linie celulara transformata in vitro

Tulpina celulara continua (susa celulara continua) - un anumit tip (fenotip) celular, selectata prin clonare si caracterizata, necontaminata cu alte tipuri celulare

Foarte multe linii celulare sunt linii contaminate (contin mai multe tipuri celulare)  

Varsta cultuii celulare

Numarul de pasaje - numarul subculturilor celulare realizate

Numarul de generatii - numarul de dublari a populatiei celulare - numar care indica varsta culturii 

Linii celulare limitate (finite) - linii celulare cu durata de viata limitata la un anumit numar de generatii (aproximativ 20-80, in functie de tipul celulelor)

Nomenclatura

Cod (nume) - ex. Normal Human Brain (NHB)

Numarul liniei daca din aceeasi sursa au fost selectate mai multe linii - Ex. NHB1, NHB2 etc

Numarul clonei daca exista mai multe (NHB1-1, NHB2-1 etc)

Numarul pasajelor dupa ultima dezghetare NHB1-1/p3

Laboratorul din care provine (Ex. WI - Wistar Institute, NCI - national cancer institute etc)

Mentinerea de rutina a liniilor celulare

Intretinerea liniilor celulare in cultura are loc prin schimbarea perioadica a mediului de cultura

Frecventa de schimbare a mediului depinde de tipul celulelor (viteza de multiplicare)

In cazul celulelor transformate, cu o crestre rapida, pasajul celular se face la aproximativ fiecare 7 zile, iar schimbarea mediului se face la 4 zile dupa subcultivare

In cazul celulelor cu o crestere mai lenta (in special pentru cele netransformate) pasajul se realizeaza la fiecare 2,3 sau chiar 4 saptammani, iar schimbarea mediului intre perioadele de subcultivarese face saptamanal

Alegerea momentului de schimb al mediului

Ciclul de crestere si numarul de dilutii

Verificarea de rutina a calitatii liniilor celulare

Verificarea pH

Majoritatea celulelor isi opresc cresterea la pH 7-6,5

Majoritatea celulelor isi pierd viabilitatea la pH 6,5-6.

Acidifierea mediului de cultura poate fi urmarita folosind indicatorul pH din mediu (phenol red), care la acidifiere vireaza de la rosu la portocaliu sau galben

Determinarea  concentratiei celulare (se rasfrange si asupra pHului)

Morfologia celulara. Semne de deteriorare a culturii:

Vacuolizarea

Granulatiile in jurul nucleului

Aspectul sferic

Adaptarea grosimii stratului de mediu, in functie de consumul de O2

Culturi consumatoare de O2 - 2 mm

Culturi  cu un consum scazut de O2 - 5 mm

Morfologie celulara anormala