Cerinte pentru manipulare in
vitro a celulelor stem embrionare
murine
Asigurarea conditiilor de sterilitate in culturile celulare este foarte importanta si dificil de
realizat. Culturile celulare pot fi usor distruse in cazul contaminarilor,
evitarea acestora necesitand vigilenta constanta.
Un laborator implicat in culturile celulare
trebuie sa aiba o camera dedicata doar culturilor "in
vitro", in care personalul trebuie sa utilizeze manusi si
sa mentina suprafetele de lucru mereu curate si
dezinfectate (Freshney I.R., 2000)
Temperatura de incubatie trebuie sa fie
in jurul valorii de 37°C. Pentru evitarea evaporarii apei si,
implicit, modificarea osmolaritatii mediului de cultura,
umiditatea relativa trebuie pastrata la 80-100%. Sistemul tampon
cu bioxid de carbon in stare gazoasa si bicarbonat de sodiu dizolvat
in solutie, utilizat in culturile celulare de zeci de ani este sistemul
standard si universal pentru
culturile celulare de mamifere (Tanaka, S., 1998). Cea mai sofisticata
parte din incubarea celulara o reprezinta sistemul de detectare a
dioxidului de carbon, care regleaza procentul de dioxid de carbon din aer
cu o precizie de 0,1% la volum. pH-ul solutiilor in care se dezvolta
celulele poate fi alterat prin schimbarea cantitatii de bioxid de
carbon din aer sau a cantitatii de bicarbonat de sodiu din
solutie (Dinsmore, J. et al, 1996). In momentul in care celulele sunt
scoase din incubator, au loc interactiuni intre mediul de cultura
si aerul atmosferic, ducand la cresterea pH-ului mediului care poate ajunge
la nivele toxice. S-au incercat mai multe metode pentru evitarea acestor
fenomene:
Fara sa ma laud, pot spune
ca femeile pe care le-am asistat la nas-tere au iesit proaspete
si rosii in obraz din maternitate, fara sa fi avut
probleme sau complicatii. Pacientele mele s-au alimentat corect in tim-pul
sarcinii, au ramas la o greutate convenabila si au
curatat corpul de orice toxemie, pentru a asigura fatului un
mediu sanatos. Travaliul lor la nastere a fost, in general,
usor si fara incidente, iar copiii au beneficiat de o
sanatate mult superioara mediei.
Sanatatea copiilor se situeaza, in
medie, la un nivel destul de sca-zut. Statisticile arata ca intre
1948 si 1952, in Statele Unite, 52% dintre tineri au trebuit sa fie
declarati inapti pentru serviciul militar, din cauze fizice sau
mentale. Asta pentru ca parintii lor erau prea saraci ca
sa le asigure o hrana sanatoasa? Nici pomeneala,
pentru ca este vorba, in ma-re parte, de copii privilegiati,
indopati cu dulciuri, cu aditivi chimici, prajituri,
inghetata, gogosi cu sirop, lapte cu ciocolata, in loc
sa fie ali-mentati rational cu proteine, hidrati de carbon,
grasimi si vitamine.
Primii ani ai copilariei sunt cei mai
importanti pentru sanatate. Este epoca in care glandele
endocrine si ficatul au cea mai buna capacitate de functionare, dand copilului
sanatos exuberanta lui naturala, energia ine-puizabila
si posibilitatile cele mai sigure de alimentare. Oasele lui ar
tre-bui sa fie la fel de solide ca
un stejar verde, dintii lui la fel de rezistenti ca fildesul,
parul des si stralucitor.
In loc de asta, noul-nascut obisnuit vine
pe lume cu organismul plin de toxine si cu intestinul plin de peconium
(bila oxidata de culoare ne-gricioasa). De fapt el est
strategia de a cultiva celulele pe
medii independente de dioxid de carbon (Invitrogen, Carlsbad, CA) in recipiente
sigilate. Problema acestei metode este faptul ca recipientele nu au
destula umiditate, ducand la modificarea osmolaritatii.
metoda
de introducere a unui aer cu 10% dioxid de carbon- gaz compresat prin apa
calduta si apoi trecut peste celule (Moore, Samantha
Alisson, 2004)
